产品简介：

万生昊天的Phos-key凝胶配制试剂盒（固定浓度）用于配制Phos-key SDS-PAGE凝胶，提供上层胶（浓缩胶）和下层胶（分离胶）的预混溶液以及Phos-key Acrylamide和ZnCl2。在常规SDS-PAGE凝胶中加入Phos-key Acrylamide和ZnCl2即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。在电泳时，固定在凝胶上的Phos-key复合物可以特异性结合磷酸化蛋白，使得磷酸化蛋白电泳迁移率降低，从而实现磷酸化和非磷酸化蛋白的分离。能检测不同形式的磷酸化蛋白，不受磷酸化抗体限制，可用于免疫印迹、质谱分析等。本产品提供中性缓冲体系，确保高稳定性和清晰的分离效果。本产品兼容 Tris-Glycine 缓冲体系，使用时需自备制胶器具和去离子水。

产品特点：

◆ 无放射性、无特殊仪器需求；

◆ 实验操作与普通SDS-PAGE一样；

◆ 结合特异性与磷酸化氨基酸的种类无关，适用于所有形式的磷酸化蛋白检测；

◆ 可检测和定量蛋白质的多种磷酸化形式，使用非磷酸化抗体可同时检测磷酸化与非磷酸化蛋白；

◆ 磷酸基团数量相同，磷酸化位点不同时也可以分离；

◆ 添加Phos-key Acrylamide和ZnCl2试剂，可自行调整优化磷酸化和非磷酸化蛋白分离效果；

◆ 与 Tris-Glycine 缓冲体系兼容；

◆ 采用了改良配方，制备好的Phos-key SDS-PAGE凝胶可在4℃下保存3个月（置于凝胶保存液中）；

◆ 提供6%、8%、10%、12%、15%等多种凝胶浓度。

保存条件：

1.配胶试剂盒2-8℃避光保存，有效期为6个月。

2.PAGE 胶凝固剂于-20℃保存，同时尽量减少室温存放时间，以防失效。

3.5 mM Phos-key Acrylamide溶液，需2-8℃避光保存。

注意事项：

1． 样品制备；

a.确保样本中不含有 EDTA 等金属离子螯合剂

b.样品中含有的还原剂、变性剂、螯合剂、钒酸等会使电泳条带发生弯曲或者拖尾，可通过TCA沉淀或透析脱盐降低杂质含量

c.避免样品中含有高浓度的还原剂，变性剂，表面活性剂等；β-巯基乙醇浓度不高于0.2 M（或者5%）

d.ATP使用浓度在2.0 mM时，对实验结果无显著影响，具体使用范围尚不清楚 e.样品可以为纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液，且样品来源无物种特异性

e.样品可以为纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液，且样品来源无物种特异性

2． 通常情况下，纯化蛋白上样量为5 - 10 μg，组织或细胞提取液上样量为15 - 30 μg，具体需要根据磷酸化蛋白表达进行调整；

3． 一般预染Marker在Phos-key凝胶中会产生条带弯曲，建议使用万生昊天的Phos-key专用Marker (MKPX015)；蛋白Marker仅作为电泳和转膜效率的指示，不能作为蛋白分子量的参考；

4． Phos-key凝胶除了考马斯亮蓝染色之外，也可使用负染、银染、荧光染色等方法进行染色；

5． 如染色的背景高，可用 EDTA 处理消除凝胶中的金属离子后再染色；

6． 上层胶溶液和下层胶溶液中含有Acr和Acr-Bis，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内；

7． PAGE 胶凝固剂的使用量仅作参考，实际用量可根据个人实验习惯和经验调整；

8． 仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床医学诊断及其他非合理用途。不得存放于普通住宅内；为了您的安全和健康，请穿戴好个人防护装备和实验服装进行操作。

9． 为了您的安全和健康，请穿戴好个人防护装备和实验服装进行操作。

1. Xingyu Gu, Ran Zhao, Haiman Li, Xinyu Dong, Meishan Meng, Tingting Li, Qiancheng Zhao, and Ying Li. Patterns of the Nutrients and Metabolites in Apostichopus japonicus Fermented by Bacillus natto and Their Ability to Alleviate Acute Alcohol Intoxication. Foods 13, 262, January 14, 2024. （doi.org/10.3390/foods13020262） (IF=5.1)