在Western Blot、细胞培养、免疫染色、核酸杂交等实验中，你是否经常被各种“XXS”“XXST”搞晕？
TBS 和 PBS 能互换吗？Hanks 和 EBSS 有啥区别？TBST 为什么总在 WB 里出现？
别再靠经验猜了！今天这篇推文，为你清晰梳理 7种实验室高频使用的生物缓冲液——从成分、pH、适用场景到避坑指南，一文讲透，建议收藏⭐️！
缓冲液的主要功能是为实验提供一个稳定、可控的化学环境。其成分是经过精确设计的，随意更换或误用会直接导致实验失败。主要原因如下：
1.1 pH值不同
每种缓冲液都有其特定的pH范围。实验中使用的酶、抗体或细胞只能在它们最适宜的pH下正常工作。使用pH不匹配的缓冲液，会显著降低它们的活性或稳定性。
1.2 化学成分不同
缓冲液中的盐分和添加剂具有特定作用：
• 磷酸盐（如PBS中）：会与溶液中的钙、镁离子结合形成沉淀，干扰相关实验，并可能堵塞精密仪器。
• 钙/镁离子（如HBSS中）：是维持细胞形态和功能所必需的，但会抑制胰酶的活性，因此在细胞消化前必须使用不含这些离子的版本。
• Tris（如TBS中）：不含有干扰作用的磷酸盐，适用于更多类型的生化反应。
1.3 渗透压不同
用于活细胞操作的缓冲液（如清洗细胞），其盐浓度必须与细胞内部相近（称为“等渗”），否则会导致细胞水分快速进出，造成细胞破裂或皱缩死亡。
不同的实验步骤对化学环境的要求截然不同。选择正确的缓冲液是实验设计的基础环节，不能凭经验互换。
2.1 PBS（Phosphate-Buffered Saline）
• 主要成分：NaCl、Na₂HPO₄、KH₂PO₄
• pH：7.2-7.4（等渗，接近人体生理环境）
• 优点：稳定、无毒、成本低
• 常见用途：
✓ 细胞清洗（短期）
✓ 抗体稀释
✓ 组织冲洗、ELISA 基础液
⚠️ 注意：含磷酸盐，不适用于钙/镁沉淀实验或磷酸酶相关反应。
2.2 PBST（PBS + Tween-20）
PBST（PBS + Tween-20）
• 就是在 PBS 中加入 0.05%-0.1% Tween-20
• 作用：增强去污能力，有效降低非特异性结合
• 典型应用：
✓ ELISA 洗板
✓ 免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）洗涤步骤
⚠️ 注意：Tween-20 易起泡，避免剧烈震荡；建议现配或 0.22 μm 过滤保存。
2.3 TBS（Tris-Buffered Saline）
• 主要成分：Tris-HCl 、 NaCl
• pH：通常调至 7.4–7.6
• 优势：不含磷酸盐，兼容性更广
• 适用场景：
✓ Western Blot（尤其搭配碱性磷酸酶标记抗体）
✓ 某些激酶或金属离子敏感实验
• vs PBS：TBS 在高 pH 或含金属离子体系中更稳定。
2.4 TBST（TBS + Tween-20）
• Western Blot 的“黄金洗液”
• 功能：高效洗去未结合的一抗/二抗，显著降低背景噪音
• 操作建议：封闭后及抗体孵育后，用 TBST 洗膜 3-5 次，每次 5-10 分钟
2.5 SSC（Saline Sodium Citrate Buffer）
• 主要成分：NaCl、柠檬酸钠
• 核心用途：核酸杂交实验
✓ Southern/Northern Blot
✓ FISH（荧光原位杂交）
✓ 微阵列芯片杂交与洗脱
• 使用方式：按实验严谨性需求稀释为 2×、0.5×、0.1× 等浓度。
2.6 HBSS（Hanks’Balanced Salt Solution）
• 主要成分：NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂、D-Glucose、NaHCO₃、酚红等
• 特点：模拟细胞外液，可短期维持细胞活性和形态
• 常见用途：
✓ 细胞清洗（比 PBS 更温和）
✓ 组织运输、解离前润洗
✓ 流式细胞术样本制备
⚠️注意：有含钙镁和无钙镁两种版本，胰酶消化前务必用“无钙镁”版！
2.7 EBSS（Earle’s Balanced Salt Solution）
• 与 HBSS 类似，但关键差异：
✓ NaHCO₃ 含量更高（需 5% CO₂ 环境维持 pH）
✓ 葡萄糖浓度较低
• 适用场景：
✓ 需在 CO₂ 培养箱中进行的长时间操作（如细胞饥饿处理）
✓ 对 pH 稳定性要求高的体外孵育
• vs HBSS：
✓ HBSS：适合室温、无 CO₂ 的短时操作
✓ EBSS：适合含 CO₂ 培养环境下的实验
• 细胞实验优先选 HBSS 或 D-PBS（无钙镁），避免 PBS 导致细胞应激。
• 含 Tween-20 的缓冲液不要高压灭菌，过滤除菌更安全。
• Hanks 与 EBSS 不可随意互换：注意实验是否在 CO₂ 培养箱中进行！
• 所有缓冲液建议用 超纯水配制，并用校准后的 pH 计确认 pH 值。
• 长期储存的缓冲液请 4℃冷藏，使用前检查是否浑浊或污染。
📌 转发+收藏这篇“缓冲液使用指南”，下次设计实验方案时直接对照，省时又靠谱！
1. 留言打卡区
📌 话题： 你在实验中用过哪种缓冲液？遇到过哪些坑或有什么独家使用心得？
👉 格式建议：
【实验类型】+【所用缓冲液】+【心得/踩坑故事】
✨ 示例：
“WB新手，一开始用PBS洗膜背景超高，换成TBST后立马干净了！”
2. 提问专区
实验中关于缓冲液还有哪些困惑？作者/评论区大佬在线答疑！
👉 比如：
“TBST的Tween-20浓度到底怎么选？”
“SSC可以高压灭菌吗？”
“无酚红缓冲液真的必要吗？”
3. “缓冲液搭配表”共创
如果你有成功的“实验+缓冲液”组合，欢迎留言补充，一起完善这张表！
| 实验类型 | 推荐缓冲液 | 理由 |
| 免疫荧光染色 | PBST | 降低背景 |
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